17525501，HisTrap FF 5 X 5 ml，親和層析標簽蛋白純化預裝柱

親和層析標簽蛋白純化預裝柱

    His 標簽蛋白純化預裝柱

    由于組氨酸標簽很小并幾乎不會干擾目的蛋白的功能、活性或結(jié)構，因此被廣泛使用。固定化金屬離子親合層析（IMAC）是純化組氨酸標簽蛋白最常用的方法。選擇性地負載共價金屬離子（比如鎳或鈷）的IMAC層析介質(zhì)能夠截留組氨酸標簽蛋白，并在變性條件下，能從包涵體中純化出不溶性的組氨酸標簽蛋白。成功的IMAC純化能得到高純度、高產(chǎn)率、高活性的目的蛋白。

    因為很多蛋白質(zhì)有內(nèi)在的組氨酸和/或半胱氨酸氨基酸殘基，其他非特異的蛋白能夠與目的蛋白一起結(jié)合到IMAC填充介質(zhì)上。這種情況下，需要經(jīng)常通過改變?nèi)芤褐羞溥虻臐舛葋韮?yōu)化結(jié)合、洗滌和洗脫的條件。增加結(jié)合和洗滌緩沖液中咪唑的濃度通常會降低非特異性結(jié)合，而更低的濃度則導致更強的親和相互作用。找到合適的平衡非常關鍵。

    MBP-標簽蛋白純化預裝柱

    麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）是一種有用的親和標簽，它們能增加生成目的蛋白的表達水平和溶解性。MBP標簽也促進依附蛋白合適的折疊。因為MBP能增加溶解性，這個標簽對以不溶形式（包涵體）聚集的重組蛋白特別有用。

    親和純化在生理條件下發(fā)生，并且使用麥芽糖進行溫和地洗脫。溫和的洗脫能保留住MBP標簽蛋白的活性。

    Strep-tag? II標簽蛋白純化預裝柱

    Strep-tag?II是一個只有8個氨基酸的小標簽，它的相對分子量只有1000。它的小尺寸非常有好處，因為在絕大多數(shù)情況下它不會干擾結(jié)構和功能研究，因此無需去除。

    Strep-tag? II特異性地結(jié)合擁有固定在瓊脂糖基底基質(zhì)的StrepTactin?配體的StrepTactin? Sepharose High Performance以獲得到高純度的目的蛋白。Strep-tag? II與該配體的結(jié)合親和力是鏈霉親和素的近100倍，使其適合于純化Strep-tag?II蛋白。在生理條件下進行純化，含有脫硫生物素的溫和洗脫液保留了目的蛋白的活性。

    GST-標簽蛋白純化預裝柱

    谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶（GST） 基因融合系統(tǒng)是用于從大腸桿菌中生產(chǎn)的GST-標簽蛋白的表達、純化和檢測的通用系統(tǒng)?？稍诜浅睾偷臈l件下對GST-標簽蛋白進行純化，從而保留目的蛋白的功能和抗原性。

    GST標簽可能增加目的蛋白的溶解性和穩(wěn)定性。GST標簽很大，其相對分子量（Mr）為26000。一段特殊的切割序列允許在純化后用不同的蛋白酶簡單地去除GST標簽。

    GST-標簽蛋白的典型特點是與谷胱甘肽瓊脂糖層析介質(zhì)上的谷胱甘肽配體高特異性的結(jié)合，一個步驟就能使洗脫的目的分子的純度超過90%

    HisTrap FF是一種即用型層析柱，預裝Ni Sepharose 6 Fast Flow，通過固相金屬離子親和層析（IMAC）對組氨酸標簽的重組蛋白進行制備性純化。